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活细胞成像要求在成像过程中的知识
发布时间:2013-02-17           浏览量:2 次
    活细胞成像要求在成像过程中始终保持镜台上细胞的存活.应注愈使用最小强度的激光,因为激光束造成的光损伤在多次扫描时可以录加起来。抗氧化剂(如维生素C)加人培养液可减少来自激发的荧光分子产生的权.因为级可引起自由基形成并杀死细胞。对于一些荧光标记实验.需评价光基礴对标本的影响.一般应进行成像后组织活性的评估。胚胎在成像后应能继续进行正常发育,如海胆胚胎在成像后应继续孵化。任何由图像采集过程或染料性质对标本产生的影响都应给予考虑。
    每种细胞在生活时都有其特定的需要,如大多数细胞需要镜台加热装置以保持适宜的M度,有时还需要滋注室以保持培养液中Co,浓度的恒定。而其他细胞.如昆虫细胞需在室沮下保持在大量培养液中。大部分共聚焦显徽镜其光子产生效率已大大改善,与更亮的物镜和更小光毒性的染料结合后.在活细胞的共聚焦分析已不成问题,但最好使用尽可能小的激光强度进行成像和尽快地采集图像。对于固定标本可增大针孔孔径以加快图像采集过程,利用去卷积方法改进图像质盆。
    许多生理学过程的发生速度比大多数LSCM获取图像的速度快,而大多数LSCM获取单祯图像的速
度约为Is。因此,对于生理学图像的采集要求速度更快的LSCM,可使用声光装I和裂隙扫描标本,而
不是采用速度较慢的点扫描系统。这一设计的优点是具有良好的与时间分辨率相配的空间分辨率,即每秒可达30祯全屏图像,接近视孩速度。另外使用点扫描LSCM,通过扫描一个大大缩小的区域也可获得良好的时间分辨率。
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